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1940年4月30日，由冀鲁豫支队一部编成，第二纵队副司令员杨得志兼（后田守尧任）旅长，吴信泉任政治委员。下辖第四、第五、第六团，隶属八路军第二纵队。在徐州、郑州、安阳、阳谷、禹城之间的冀鲁豫地区进行杭日作战，反对日伪军的“扫荡”。同年6月，第五、第六团南下淮北、苏北地区，后编为八路军第五纵队第二支队。1941年7月7日，旅部和第四团及新编第三旅编为八路军教导第七旅