Alexa Fluor 系列染料――可见光谱的最佳染料

Alexa Fluor 是荧光标记试剂的一大突破，包括一系列近紫外、可见光和近红外光谱的优良染料，这些

试剂产生的偶联物无一例外是实验检测过最好和最亮的，在蓝光和远红光范围提供了多色检测和FRET（荧

光共振能量转移）的多种选择。和R－PE 或APC 联用的Tandem 染料扩展了Alexa Fluor 在多色检测的应用。

Alexa Fluor 的优点如下：

亮度 — Alexa Fluor 偶联物相比其他染料荧光更强。

光稳定性 — Alexa Fluor 偶联物相比其他染料光稳定性更强，提供更长的图像捕获时间。

仪器兼容性 — Alexa Fluor 偶联物的吸收光谱与普通激发光源的主要输出波长相匹配。

多种颜色 — Alexa Fluor 偶联物有蓝色到红色的多种直接荧光.

pH 值不敏感 — Alexa Fluor 染料在一个广泛的pH 范围内保持强荧光.

水溶性 — Alexa Fluor 反应性染料有良好的水溶性, 无需有机试剂即可结合蛋白, 且储存不易产

生沉淀.

Alexa Fluor 染料的光谱特性:

􀁺 Alexa Fluor 350— 亮蓝和紫外光激发

Alexa Fluor 350 的蓝色荧光比AMCA 亮50%，而且最大发射波长稍短（为442 nm ，AMCA 为

448nm），因此更容易与现有的绿色荧光基团区分。

􀁺 Alexa Fluor 405 —近乎完美的匹配蓝色二极管激光器

Alexa Fluor 405 的激发/发射最大波长为402/421 nm，与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm

谱线的蓝色二极管激光器近乎完美的匹配。Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反应性衍生

物，后者是乙酰叠氮化物。Alexa Fluor 405 琥珀酰酯纯度更高且有一个4-哌啶羧酸的间隔，使得荧光基团

与其偶联的生物分子之间的反应性最小化。

􀁺 Alexa Fluor 430—高斯托克斯频移的430 nm 吸收

少数 400 nm ~ 450 nm 吸收的染料在水溶液中可测荧光偏离500 nm。Alexa Fluor 430 弥补了这一缺

陷，430 nm 激发时发射在540 nm 附近。

􀁺 Alexa Fluor 488—最好的绿色荧光基团

Alexa Fluor 488 偶联蛋白优于其他荧光素，实验证明比包括Cy2 的其他绿色荧光基团都好。不仅亮度

更高，而且光稳定性更好。在pH4～10 保持稳定是另一优越之处。

􀁺 Alexa Fluor 532 —最适于532 nm 激发光源的染料

激发发射波长位于绿色荧光Alexa Fluor 488 和橙色荧光的Alexa Fluor 546 之间，适用于双频Nd:YAG

激光器在内的532 nm 激发光源。

􀁺 Alexa Fluor 546—Cy3 和四甲基罗丹明的替代物

Alexa Fluor 546 标记的偶联物良好应用于橙色范围光谱，比四甲基罗丹明(TRITC 、TAMRA) 及Cy3 荧

光更强，容易被汞弧灯激发，发射波长546 nm。

􀁺 Alexa Fluor 555—优于Cy3 的替代物

Alexa Fluor 555 与Cy3 偶联物的光谱相匹配，因此适用于Cy3 的滤光器。Alexa Fluor 555 的总荧光

更强，且光稳定性更好，为研究者提供了更长的图像捕获时间。

􀁺 Alexa Fluor 568 —最适于568 nm 激发光源

Alexa Fluor 568 的橙红色荧光最适用于激光共聚焦显微镜的Ar–Kr 混合气体激光器，其发射的谱线为

568 nm。与具有相似最大激发/发射波长的Lissamine Rhodamine B 和Rhodamine Red-X 相比， Alexa

Fluor 568 的偶联物亮度更高。

􀁺 Alexa Fluor 594 —优于Texas Red 的替代品

Alexa Fluor 594 偶联物发出红色光，可与绿色荧光探针一同用于多色标记实验。比Texas Red 偶联物

有更高的亮度。

􀁺 Alexa Fluor 610—Alexa Fluor 最好的红色染料

Alexa Fluor 610 亮度高、光稳定， 可用检测 Texas Red 和Alexa Fluor 594 的光学元件检测。前身是

FRET-based Alexa Fluor–phycobiliprotein 的受体染料。新的Alexa Fluor 610 激发/发射波长为612/628

nm，容易与绿色荧光基团相区分，适用于多色标记。Alexa Fluor 610 仍为人眼可见，优于Alexa Fluor 633

和其他更长波长的荧光团。

􀁺 Alexa Fluor 633 —光稳定性更强

远红光染料近来大受欢迎，是因为它们的光谱范围在大多数样品的自发荧光之外。He–Ne 激光器

633 nm 和红色二极管激光器635 nm 谱线的广泛应用加速了兼容染料的开发。Alexa Fluor 633 偶联物具有

亮度和光稳定性，吸收峰在632 nm，发射峰在650 nm。

􀁺 Alexa Fluor 635 —He–Ne 激光器633 nm 线的最佳染料

新的 Alexa Fluor 635 染料，其偶联物比Alexa Fluor 633 亮度更高，因为它的吸收光谱不会象Alexa

Fluor 633、Cy5 和tetramethylrhodamine 那样分成两个峰。Alexa Fluor 635 同样适用于He–Ne 激光器的

633 nm 谱线和红色二极管激光器的635 nm 谱线，吸收峰在633 nm，发射峰在647 nm。

􀁺 Alexa Fluor 647 —优于Cy5 的替代品

Alexa Fluor 647 与Cy5 偶联物的光谱及滤光器相匹配。Alexa Fluor 647 二抗偶联物的总荧光亮度高

于其他公司的Cy5 偶联物。在与大多数的蛋白质、寡核苷酸和核酸结合时，Alexa Fluor 647 相比Cy5 荧光

吸收光谱波动很小，因此在同等程度的替换时发出的荧光更强。

􀁺 Alexa Fluor 680 —Cy5.5 的替代物

Alexa Fluor 680 的激发峰在679 nm，最大发射为702 nm，与Cy5.5 类似。Alexa Fluor 680 能够很好

的与其他红色荧光团区分，如 Texas Red, R-phycoerythrin, Alexa Fluor 594 和Alexa Fluor 647，是理想

的三色与四色标记用染料。

􀁺 Alexa Fluor 700 —远红光二极管激光器的最适染料

Alexa Fluor 700 最大吸收在696 nm，能够被675–700 nm 范围的氙弧灯、远红外二极管激光器或

dye-pumped lasers 激发。发射光在红外区，峰值为719 nm。

􀁺 Alexa Fluor 750—Alexa Fluor 最长波长的产品

Alexa Fluor 750 是目前的Alexa Fluor 系列产品中波长最长的产品，与Cy7 光谱相似。其发射的最大

波长为779 nm，能够和Alexa Fluor 647 及allophycocyanin (APC)区分，适合多色分析。Alexa Fluor 700

偶联物 752 nm 的最大激发光使其适用于720–750 nm 范围的氙弧灯或dye-pumped lasers。